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细菌和真菌标本的采集指南

发布日期:12月8日点击量:8148

    标本采集和运送是细菌和真菌培养成功的最最重要的关键!但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事情,而且不知道问题所在之处,由此引发的最主要后果是阳性率下降,这也是临床医生最不能接受的问题. 因此,临床微生物检验标本采集应规范化, 有助于临床合理使用抗菌药物.

 

表1血和脊髓

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

血培养

最佳采血时间:尽可能在抗菌药物使用前,尽可能在寒颤和发热初起时。

培养瓶的消毒:弃去瓶顶塑料帽,用75%乙醇棉球消毒瓶顶橡皮塞,待干60秒。

静脉穿刺消毒:严格按照皮肤消毒步骤操作(建议使用洗必泰)。

血液培养必须特别注意消毒,避免皮肤表层细菌造成污染。

 

采得的血首先应打入需氧瓶,然后再打入厌氧培养瓶,有利于更好地分离出真菌、绿脓杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。

 成人:8~10ml/瓶.

新生儿:1~3ml/瓶.

 

常规血培养应该包括至少一个需氧培养瓶和一个厌氧培养瓶(称“1套”)。

 

一些数据显示,另加一个厌氧瓶比仅仅是用需氧瓶的效果好.

≤2 h,常温,禁止冰箱保存。

≤24h,常温,,禁止冰箱保存。

3套/24h

急性脓毒病:10min内从不同的部位采集2-3套。

急性心内膜炎:1-2h从3个分离部位采3套。

亚急性心内膜炎:从不同部位采3套,间隔15min,如24h内为阴性,要再采3 套。

原因不明发热:从不同部位采2-3套,间隔≥1h,如24h内为阴性,须再采3套。

主要病原菌:

沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌。

以下菌应视为非病原菌(除非大于1次血培养分离出):

芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌

 

脊髓

 注意无菌操作

接种血培养瓶≥1ml

≤2h,常温,禁止冰箱保存。

≤24h,常温,禁止冰箱保存。

1/d

少量脊髓可直接接种培养基

 

 

 

 

 

 

 

 

培养瓶种类: 未用过抗菌药物的需氧培养瓶(兰色);

未用过抗菌药物的厌氧培养瓶(紫色);

用过抗菌药物的需氧培养瓶(绿色);

用过抗菌药物的厌氧培养瓶(棕色);

儿童需氧培养瓶(黄色)    

  

表 2脑脊液

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

 

 

CSF

1.用2%碘酒消毒采集部位。

2.用专用的针头插入

3.进入蛛网膜下腔后,采集液体,放入无菌试管中。

无菌试管,

细菌≥1ml ,

真菌≥2ml ,

抗酸杆菌≥2ml

细菌:不要冷冻;

≤15min,常温

≤24h

常温

应同时做涂片直接镜检和培养。

培养时可打入血培养瓶中。

 

标本≥1ml 时需要离心。1500g/15min

 

主要病原菌:

 B群β溶血链球菌(新生儿),流感嗜血杆菌(2月-2岁儿童),肺炎链球菌,脑膜炎奈瑟氏菌、新生隐球菌、结核分枝杆菌。

 

表3鼻咽喉标本

 

标本

类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

 

 

用预先被无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔约2cm,对着鼻粘膜用力旋转,蘸取粘膜上分泌物,缓慢抽出,将拭子直接送检。

拭子转运

 

 

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

 

≤24h,

常温

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

用压舌板压舌,用无菌拭子从咽后、扁桃体和发炎区域采样,不要碰触舌头和面颊。

 

拭子转运

 

≤2h,常温

 

≤24h,

常温

 

1/d

 

喉拭子培养不能用于会厌发炎的患者。

 

 

主要病原菌:A群β溶血链球菌

可选择性报告:溶血隐秘杆菌

 

 

表4尿

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

女性,

中段

1.用肥皂水完全清洗尿道区域

2.用湿纱布垫漂洗

3.分开阴唇,开始排尿

4.采集中段尿

无菌广口容器≥3ml。

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

≤24h,

4℃

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

女性尿中的衣原体抗原可能难以检出。

 

若培养2种以上细菌生长,报告“混合菌群”,可疑污染。

 

中段

 

1.用肥皂和水完全清洗阴茎头

2.用湿纱布垫漂洗

3.回缩包皮,开始排尿

4.采集中段。

 

无菌广口容器≥3ml。

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

≤24h,

4℃

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

直接

采集

 

1.用肥皂和水完全清洗尿道区域

2.用湿纱布垫漂洗

3将导管无菌插入膀胱

4.流过15ml尿之后,采集尿入无菌容器内

 

无菌防漏容器≥3ml。

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

≤24h,

4℃

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

 

该方法可能导致尿道菌落进入膀胱并增加医源性感染的危险

滞留

采集

1.用70%乙醇消毒导管采集部分

2.用针头和注射器无菌采集5-10ml 尿

3.转入无菌管或容器内

无菌防漏容器≥3ml。

 

≤2h,常温

 

 

≤24h,

4℃

1/d

 

滞留导管会使膀胱带有细菌,尽可能不采用。

 

主要病原菌:

大肠埃希菌、变形杆菌、克雷伯菌、其它革兰阴性杆菌

肠球菌、腐生葡萄球菌、纯的金黄色葡萄球菌

 

 

表5下呼吸道标本

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

下支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子刷出物、气管抽吸物,肺穿刺或活组织

将抽吸物或洗出物放入痰采集器内,将刷出物放入有盐水的无菌容器内。

 

 

无菌容器>1ml

 

 

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

 

 

定量分析管40-80ml液体量,做刷出物的定量分析,可将刷出物放入0.5ml的胰蛋白酶大豆肉汤中

 

 

 

 

痰,咳出

 

 

 

 

在医生或护士的直接指导下采集标本,让患者清洗咽喉或漱口,患者深咳肺部痰,不要唾液。

 

无菌容器

细菌:

>1ml

真菌:3-5ml

分支杆菌:5-10ml

 

≤2h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

 

 

 

合格的标本应在低倍视野下≤10个鳞状细胞。

若标本中含有食物拒收。

肺炎链球菌在2小时内死亡。

冷藏保存不会检出肺炎链球菌。

 

 

 

 

 

 

痰,诱导性

 

刷完牙后让患者用水漱口,借助相关仪器使患者吸入25ml3%-10%的无菌盐水,采集诱导的痰到无菌容器内。

 

无菌容器>1ml

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

1/d

 

一旦获得标本,需立即送检,因为荚膜组织包浆菌和皮炎芽生菌仅能够短暂存活一段时间。

 

 

主要致病菌:肺炎链球菌、克雷伯菌属、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌

非病原菌:酵母菌、草绿色链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌

 

 

表6粪便

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

常规

培养

 

 

 

直接置入一清洁、广口的无菌容器

 

 

无菌容器≥2g或者≥1.5ml

 

 

 

≤1h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

住院时间超过3 d或入院诊断不是胃肠炎的患者不做常规粪便培养。对这些患者应进行梭状芽孢杆菌的培养或毒素检测。

 

 

梭状芽

孢杆菌

将液体或软大便直接送入清洁、广口无菌容器内。

无菌容器:≥2g或者≥1.5ml

 

≤1h,常温

1-2h,4℃

>24h,-20℃

 

 

培养:

2 d,4℃,

3 d, 4℃或-70℃更长用于毒素检测

1/2d

 

 

 

 

 

患者应该是每24h排泻液体或软大便≥5次的患者。

-20℃冷冻易于使细胞毒素快速丢失。

 

Ecoli

O157:H

 

 

将液体或血便放入一清洁、干燥的容器

 

无菌容器≥2g或〉2ml

 

≤1h,常温

 

 

≤24h, 4℃

 

 

 

1/d

 

 

 

有腹部痉挛的患者在发病6小时内采集到的血或液状便效果更好

 

 

 

 

直肠拭子

1.小心插入无菌拭子超越肛门括约肌约2-4cm

2.轻轻旋转拭子,在肛门隐窝取样

3.用于检测病原的拭子上应能看到粪便

拭子转运

 

≤1h,常温

≤24h,常温

 

 

 

1/d

对淋球菌、志贺氏菌、弯曲菌及肛门携带的B群链球菌的检测,或不能留样的患者,是保留的方法。

婴儿和有腹泻症状的患者推荐用拭子做常规病原菌检测。

 

主要病原菌:

沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌

产毒性大肠杆菌或难辨梭菌(在常规的试验室可能不开展)

 

 

表7眼部标本

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

 

结膜

 

 

 

分别用(无菌盐水预湿)拭子绕每一个结膜滚动采集标本。

 

拭子转运

 

 

 

 

 

 

 

≤15min,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

≤24h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

即使只有一个眼睛感染,如可能,对每一结膜都要取样 ;可使用未感染眼作为对照,和分离的感染眼的细菌进行比较;如费用限制,可根据革兰氏染色的结果,帮助对培养物进行解释,以确定固有菌群

 

 

角膜

刮擦

在麻醉下,用刮勺在溃疡或者创伤边缘刮取碎屑,直接接种在培养基平板上培养和涂片。

 

直接培养接种血平板和巧克力平板。

 

 

≤15min,常温

 

 

 

 

 

24h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

建议:培养用拭子采样要先于麻醉药的应用,而角膜刮擦可稍后进行。

眼部感染所获取的标本量很少,建议取样后直接接种在平板上培养和涂片。

 

 

 

液体或

抽取液

 

用针头抽吸液体。

 

无菌容器

 

或直接将少量液体接种于培养基

 

≤15min,常温

 

≤24h,常温

 

 

1/d

 

也可进行真菌培养。

 

因为麻醉药对于一些病原体有抑制作用,所以要在用麻醉药之前采样。

 

 

表8耳部标本

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

 

 

 

 

 

内耳

 

对复杂的,反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓室穿刺术:

接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液体;

对破裂的鼓室,借助耳科诊视器,用软杆拭子收集液体。

无菌容器或拭子转运培养或厌氧培养基

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

≤24h,常温

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

喉或鼻咽部的拭子培养结果不足以诊断中耳炎的致病因子,不应该递送

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

外耳

 

用湿拭子将耳道的碎屑或痂皮拭去,

在外耳道用力旋转拭子取样

 

拭子转运

 

≤2h,常温

 

 

≤24h,4℃

 

 

1/d/

 

患有外耳炎患者,需要深部耳拭子,因为浅表拭子可能遗漏链球菌引起的蜂窝织炎;

对于外耳道应用力取样,表面取样可能采不到蜂窝组织炎链球菌

 

 

表9脓肿

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

 

开放性

 

 

用无菌盐水拭去表面渗出物,

用拭子深入溃疡基底部或边缘部采集。

拭子送检系统

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

≤24h,常温

 

 

 

 

1/d

 

 

组织或液体拭子优于拭子标本,如必须用拭子,采集2个,分别做培养和革兰氏染色

 

 

 

封闭性

 

 

 

用注射器抽吸,将所有标本转入厌氧转运装置

 

 

厌氧送检系统≥1ml

 

≤2h,常温

 

 

≤24h,常温

 

 

1/d

从脓肿底部或脓肿壁的取样,结果更好

取样时,可能会带入与感染过程无关的定植细菌

 

 

 

液体:

腹部的、羊膜的、腹水的、关节穿刺液、心包的、腹膜的、滑膜的、胸膜的、胸腔穿刺液

1.用2%碘酒充分消毒皮肤

2.经皮穿刺抽吸或外科获取标本

3.立即转运至实验室

4.尽量多呈送液体:不要将拭子浸入液体内转运

用于细菌和酵母菌的血培养瓶或无菌容器或厌氧转运系统。

细菌≥1ml

真菌≥10ml

分枝杆菌≥10ml

≤1h,常温

≤24h,常温;

 

心包液或用于真菌培养的液体,≤24h,4℃

 

 

羊水和后穹隆穿刺液应用厌氧系统送检,革兰染色前不需离心。其他液体检测最好用细胞离心制备物做革兰氏染色。

体液 (特别是关节液)如果清亮且无脓,床旁直接注入血培养瓶。

关节液中的吞噬细胞很活跃,可在几小时内杀死细菌。

 

主要病原菌:金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其它β溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其它革兰阴性杆菌、

非病原菌:凝固酶阴性葡萄球菌、少量的棒状革兰阳性杆菌

 

 

表10男女生殖器标本

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

羊膜

1.经羊膜穿刺、剖宫产、子宫内导管抽吸

2.将液体转入厌氧转运系统

厌氧转运系统,≥1ml

≤15min,常温

≤2h,常温

不能接受用拭子采集或经阴道抽吸的羊膜标本,因为有潜在的阴道共生菌的污染

 

前列腺

1.用碘制剂消毒皮肤

2.用导管抽吸液体

厌氧转运系统,≥1ml

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

 

 

 

 

 

宫颈

1.用涂有润滑剂的扩阴器使宫颈可见

2.用拭子从宫颈上拭去粘液和分泌物,丢掉拭子

3.用新的无菌拭子紧贴宫颈内壁轻轻采样

拭子转运系统

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

可在渗出液中发现淋球菌,而衣原体可感染特定的细胞。

后穹隆

抽吸液

厌氧培养,〉1ml

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

 

 

 

子宫内膜

1.通过导管经宫颈采样

2.将标本全部转入厌氧转运系统

厌氧培养,〉1ml

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

 

 

 

 

 

妊娠产物

1.将组织的一部分送入无菌容器

2.如果从剖宫产获得,立即转入厌氧转运系统

 

无菌容或厌氧转运系统

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

不要处理恶露,该标本的培养不一定提供临床上有意义的结果,而且该结果可能会有误导作用。

女性尿道

患者排尿1h后采集

1.拭去尿道口的分泌物

2.用拭子通过阴道,靠耻骨联合,按摩尿道,采集尿液

拭子转运

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

如未获得尿液,用肥皂洗外尿道,并用水冲洗,用泌尿生殖道拭子插入尿道2-4cm,旋转拭子2s

 

 

 

 

阴道

1.清除过多的分泌物和排出液

2.用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜处获取分泌物 

3.如果需要涂片,再用一个拭子

拭子转运

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

 

 

 

 

女性或男

性的损伤

1用无菌盐水清洗损伤部位,用解剖刀刃切去损伤表面

2.使渗出物聚集

3.按压损伤底部,用无菌拭子用力采集渗出物

拭子转运

≤2h,常温

≤2h,常温

1/d

用暗视野显微镜检查来辨认梅毒螺旋体,用载玻片接取渗出液,加盖玻片,放在保湿的装置里(每个平皿用一个湿纱布)立即转运到实验室。检测梅毒的标本不交送培养

 

 

 

 

男性前列腺

 

1.用肥皂和水清洗阴茎头

2.通过直肠按摩前列腺

3.用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内

拭子转运或无菌管

 

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

 

 

 

≤2h,常温

 

 

 

 

 

 

 

1/d

 

 

 

 

 

 

 

按摩后立即采集尿标本,可获得更多尿道和膀胱微生物相关性的结果。精液也可以培养

 

 

 

男性尿道

用泌尿道生殖拭子插入尿道腔2-4cm,旋转拭子,至少停留20s,而使之容易吸收

拭子转运

≤2h,常温

 

≤2h,常温

 

1/d

 

 

主要病原菌:

淋病奈瑟菌、滴虫、酵母菌或女性的细菌性阴道病综合征、孕妇携带的B群β溶血链球菌

 

 

表11真菌

 

标本类型

采集

时间和温度

重复采样限制

说明

原则

装置和

最小量

转运

储存

 

 

皮肤

真菌

用75%乙醇清洗患处、在损伤的边缘轻轻挂擦皮肤表面。不要出血。将样本置于清洁容器内或两个清洁玻片之间。

清洁容器,刮擦的量足以覆盖图钉头部

≤2h,常温

 

1/d部位

如标本处于两玻片之间被呈送,应将两玻片粘牢,并置于信封内

 

 

 

 

组织

用无菌容器呈送

小样本应滴加几滴无菌生理盐水保持湿润

不能使组织干涸

厌氧转运系统或无菌旋帽瓶,需要加一些盐水

≤15min,

常温

≤24h,常温

呈送组织的量尽可能多。  

不要呈送在表面简单摩擦拭子

 

头发,皮肤真菌病

1.用镊子采集至少10-12根具有完整并部感染头发

2.放入清洁的管内或容器内

清洁容器10根头发

≤2h,常温

 

1/d部位

在刮擦损伤的同时,如有头皮屑,应采集。注意近期所采取的人和抗真菌治疗

指甲,皮肤真菌病

1.用75%乙醇的纱布(非棉花)擦指甲

2.剪去感染的部分,从指甲下收集材料或碎片

3.将材料放入清洁容器内

清洁容器刮擦的足量以覆盖图钉头

 

≤2h,常温

1/d

 

 

主要病原菌:新型隐球菌、人芽囊原虫、皮肤藓菌、其它真菌(考虑标本来源和病人情况)

 

 

表12医院感染监控标本

 

标本类型

采集原则

物体表面

1.用5cm×5cm 的标准灭菌规格板,放在被检物体表面,要求采样面积≥100cm2 ,连续采样4个。

2.用含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子一支,在规格板内横竖往返均匀涂擦各五次,并随之转棉拭子。

3.剪去手接触部位后,将棉拭子投入10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内,立即送检。

4.门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

医疗器械

1.将存放在有效期内的医疗器械直接送微生物科室。

2.送检时间不得超过六小时,若样品保存于0~4摄氏度,,则不得超过24小时

空气(平板暴露法)

1.采样时间:在消毒处理后,操作前进行采样

2.布点方法:室内面积≤30 m2设内、中、外对角线3点,内、外点布点部位距离墙壁1m处;室内面积>30 m2,设4角及中央5点,4角的布点部位距离墙壁1m处。

3.采样方法:将普通营养琼脂平板(直径为9cm)放在室内各采样点处,采样高度为距离地面1.5m。采样时将平板盖打开,扣放于平板旁,暴露5分钟,盖好立即送检。

医务人员手

1.被检人洗手消毒后(切勿擦干),五指并拢。

2.将棉拭子浸泡在含相应中和剂的无菌洗脱液中。

3.用棉拭子从双手屈指面从指根到指端往返涂擦两次(一只手涂擦面积约30cm2),并随之转动采样棉拭子。

4.剪去操作者手接触的部位,将棉拭子投入10ml的含相应中和剂的无菌洗脱液的试管中,立即送检。

5.将采样管在混匀器上震荡20s或者用力振打80次。

6.用无菌吸管吸取1ml带检样品接种于灭菌平皿。

7.每一个样本接种在2个平皿,再加入已溶化的45~48摄氏度的营养琼脂15~18ml,边倾倒边摇匀,待琼脂凝固。

8.将平皿之36摄氏度温箱培养48h,计数菌落数。