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细菌和真菌标本的采集指南
标本采集和运送是细菌和真菌培养成功的最最重要的关键!但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事情,而且不知道问题所在之处,由此引发的最主要后果是阳性率下降,这也是临床医生最不能接受的问题. 因此,临床微生物检验标本采集应规范化, 有助于临床合理使用抗菌药物.
表1血和脊髓
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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血培养 |
最佳采血时间:尽可能在抗菌药物使用前,尽可能在寒颤和发热初起时。 培养瓶的消毒:弃去瓶顶塑料帽,用75%乙醇棉球消毒瓶顶橡皮塞,待干60秒。 静脉穿刺消毒:严格按照皮肤消毒步骤操作(建议使用洗必泰)。 血液培养必须特别注意消毒,避免皮肤表层细菌造成污染。
采得的血首先应打入需氧瓶,然后再打入厌氧培养瓶,有利于更好地分离出真菌、绿脓杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。 |
成人:8~10ml/瓶. 新生儿:1~3ml/瓶.
常规血培养应该包括至少一个需氧培养瓶和一个厌氧培养瓶(称“1套”)。
一些数据显示,另加一个厌氧瓶比仅仅是用需氧瓶的效果好. |
≤2 h,常温,禁止冰箱保存。 |
≤24h,常温,,禁止冰箱保存。 |
3套/24h |
急性脓毒病:10min内从不同的部位采集2-3套。 急性心内膜炎:1-2h从3个分离部位采3套。 亚急性心内膜炎:从不同部位采3套,间隔15min,如24h内为阴性,要再采3 套。 原因不明发热:从不同部位采2-3套,间隔≥1h,如24h内为阴性,须再采3套。 |
|
主要病原菌: 沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌。 以下菌应视为非病原菌(除非大于1次血培养分离出): 芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌 |
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脊髓 |
注意无菌操作 |
接种血培养瓶≥1ml |
≤2h,常温,禁止冰箱保存。 |
≤24h,常温,禁止冰箱保存。 |
1/d |
少量脊髓可直接接种培养基 |
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培养瓶种类: 未用过抗菌药物的需氧培养瓶(兰色);
未用过抗菌药物的厌氧培养瓶(紫色);
用过抗菌药物的需氧培养瓶(绿色);
用过抗菌药物的厌氧培养瓶(棕色);
儿童需氧培养瓶(黄色)
表 2脑脊液
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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CSF |
1.用2%碘酒消毒采集部位。 2.用专用的针头插入 3.进入蛛网膜下腔后,采集液体,放入无菌试管中。 |
无菌试管, 细菌≥1ml , 真菌≥2ml , 抗酸杆菌≥2ml |
细菌:不要冷冻; ≤15min,常温 |
≤24h 常温 |
无 |
应同时做涂片直接镜检和培养。 培养时可打入血培养瓶中。
标本≥1ml 时需要离心。1500g/15min
|
主要病原菌: B群β溶血链球菌(新生儿),流感嗜血杆菌(2月-2岁儿童),肺炎链球菌,脑膜炎奈瑟氏菌、新生隐球菌、结核分枝杆菌。 |
表3鼻咽喉标本
标本 类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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鼻
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用预先被无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔约2cm,对着鼻粘膜用力旋转,蘸取粘膜上分泌物,缓慢抽出,将拭子直接送检。 |
拭子转运
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≤2h,常温
|
≤24h, 常温
|
1/d
|
|
喉 |
用压舌板压舌,用无菌拭子从咽后、扁桃体和发炎区域采样,不要碰触舌头和面颊。 |
拭子转运 |
≤2h,常温 |
≤24h, 常温 |
1/d |
喉拭子培养不能用于会厌发炎的患者。
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主要病原菌:A群β溶血链球菌 可选择性报告:溶血隐秘杆菌 |
表4尿
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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女性, 中段 |
1.用肥皂水完全清洗尿道区域 2.用湿纱布垫漂洗 3.分开阴唇,开始排尿 4.采集中段尿 |
无菌广口容器≥3ml。
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≤2h,常温
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≤24h, 4℃
|
1/d
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女性尿中的衣原体抗原可能难以检出。
若培养2种以上细菌生长,报告“混合菌群”,可疑污染。 |
男 性 , 中段 |
1.用肥皂和水完全清洗阴茎头 2.用湿纱布垫漂洗 3.回缩包皮,开始排尿 4.采集中段。 |
无菌广口容器≥3ml。
|
≤2h,常温
|
≤24h, 4℃
|
1/d
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|
直接 导 管 采集 |
1.用肥皂和水完全清洗尿道区域 2.用湿纱布垫漂洗 3将导管无菌插入膀胱 4.流过15ml尿之后,采集尿入无菌容器内 |
无菌防漏容器≥3ml。
|
≤2h,常温
|
≤24h, 4℃
|
1/d
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该方法可能导致尿道菌落进入膀胱并增加医源性感染的危险 |
滞留 导 管 采集 |
1.用70%乙醇消毒导管采集部分 2.用针头和注射器无菌采集5-10ml 尿 3.转入无菌管或容器内 |
无菌防漏容器≥3ml。
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≤2h,常温
|
≤24h, 4℃ |
1/d
|
滞留导管会使膀胱带有细菌,尽可能不采用。 |
|
主要病原菌: 大肠埃希菌、变形杆菌、克雷伯菌、其它革兰阴性杆菌 肠球菌、腐生葡萄球菌、纯的金黄色葡萄球菌 |
表5下呼吸道标本
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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下支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子刷出物、气管抽吸物,肺穿刺或活组织 |
将抽吸物或洗出物放入痰采集器内,将刷出物放入有盐水的无菌容器内。
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无菌容器>1ml
|
≤2h,常温
|
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1/d
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定量分析管40-80ml液体量,做刷出物的定量分析,可将刷出物放入0.5ml的胰蛋白酶大豆肉汤中 |
痰,咳出
|
在医生或护士的直接指导下采集标本,让患者清洗咽喉或漱口,患者深咳肺部痰,不要唾液。 |
无菌容器 细菌: >1ml 真菌:3-5ml 分支杆菌:5-10ml |
≤2h,常温
|
|
1/d
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合格的标本应在低倍视野下≤10个鳞状细胞。 若标本中含有食物拒收。 肺炎链球菌在2小时内死亡。 冷藏保存不会检出肺炎链球菌。 |
痰,诱导性 |
刷完牙后让患者用水漱口,借助相关仪器使患者吸入25ml3%-10%的无菌盐水,采集诱导的痰到无菌容器内。 |
无菌容器>1ml
|
≤2h,常温 |
|
1/d |
一旦获得标本,需立即送检,因为荚膜组织包浆菌和皮炎芽生菌仅能够短暂存活一段时间。
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|
主要致病菌:肺炎链球菌、克雷伯菌属、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 非病原菌:酵母菌、草绿色链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌 |
表6粪便
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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常规 培养
|
直接置入一清洁、广口的无菌容器
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无菌容器≥2g或者≥1.5ml
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≤1h,常温
|
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1/d
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住院时间超过3 d或入院诊断不是胃肠炎的患者不做常规粪便培养。对这些患者应进行梭状芽孢杆菌的培养或毒素检测。 |
梭状芽 孢杆菌 |
将液体或软大便直接送入清洁、广口无菌容器内。 |
无菌容器:≥2g或者≥1.5ml
|
≤1h,常温 1-2h,4℃ >24h,-20℃
|
培养: 2 d,4℃, 3 d, 4℃或-70℃更长用于毒素检测 |
1/2d
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患者应该是每24h排泻液体或软大便≥5次的患者。 -20℃冷冻易于使细胞毒素快速丢失。 |
E.coli O157:H
|
将液体或血便放入一清洁、干燥的容器 |
无菌容器≥2g或〉2ml |
≤1h,常温
|
≤24h, 4℃
|
1/d
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有腹部痉挛的患者在发病6小时内采集到的血或液状便效果更好 |
直肠拭子 |
1.小心插入无菌拭子超越肛门括约肌约2-4cm 2.轻轻旋转拭子,在肛门隐窝取样 3.用于检测病原的拭子上应能看到粪便 |
拭子转运
|
≤1h,常温 |
≤24h,常温
|
1/d |
对淋球菌、志贺氏菌、弯曲菌及肛门携带的B群链球菌的检测,或不能留样的患者,是保留的方法。 婴儿和有腹泻症状的患者推荐用拭子做常规病原菌检测。 |
|
主要病原菌: 沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌 产毒性大肠杆菌或难辨梭菌(在常规的试验室可能不开展) |
表7眼部标本
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
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结膜
|
分别用(无菌盐水预湿)拭子绕每一个结膜滚动采集标本。
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拭子转运
|
≤15min,常温
|
≤24h,常温
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无
|
即使只有一个眼睛感染,如可能,对每一结膜都要取样 ;可使用未感染眼作为对照,和分离的感染眼的细菌进行比较;如费用限制,可根据革兰氏染色的结果,帮助对培养物进行解释,以确定固有菌群 |
角膜 刮擦 |
在麻醉下,用刮勺在溃疡或者创伤边缘刮取碎屑,直接接种在培养基平板上培养和涂片。
|
直接培养接种血平板和巧克力平板。
|
≤15min,常温
|
24h,常温
|
无
|
建议:培养用拭子采样要先于麻醉药的应用,而角膜刮擦可稍后进行。 眼部感染所获取的标本量很少,建议取样后直接接种在平板上培养和涂片。 |
液体或 抽取液 |
用针头抽吸液体。 |
无菌容器
或直接将少量液体接种于培养基 |
≤15min,常温 |
≤24h,常温
|
1/d |
也可进行真菌培养。
因为麻醉药对于一些病原体有抑制作用,所以要在用麻醉药之前采样。 |
表8耳部标本
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
|||
内耳
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对复杂的,反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓室穿刺术: 接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液体; 对破裂的鼓室,借助耳科诊视器,用软杆拭子收集液体。 |
无菌容器或拭子转运培养或厌氧培养基
|
≤2h,常温
|
≤24h,常温
|
1/d
|
喉或鼻咽部的拭子培养结果不足以诊断中耳炎的致病因子,不应该递送
|
外耳 |
用湿拭子将耳道的碎屑或痂皮拭去, 在外耳道用力旋转拭子取样 |
拭子转运 |
≤2h,常温
|
≤24h,4℃
|
1/d/ |
患有外耳炎患者,需要深部耳拭子,因为浅表拭子可能遗漏链球菌引起的蜂窝织炎; 对于外耳道应用力取样,表面取样可能采不到蜂窝组织炎链球菌 |
表9脓肿
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
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原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
|||
开放性
|
用无菌盐水拭去表面渗出物, 用拭子深入溃疡基底部或边缘部采集。 |
拭子送检系统
|
≤2h,常温
|
≤24h,常温
|
1/d
|
组织或液体拭子优于拭子标本,如必须用拭子,采集2个,分别做培养和革兰氏染色 |
封闭性
|
用注射器抽吸,将所有标本转入厌氧转运装置
|
厌氧送检系统≥1ml |
≤2h,常温
|
≤24h,常温
|
1/d |
从脓肿底部或脓肿壁的取样,结果更好 取样时,可能会带入与感染过程无关的定植细菌 |
液体: 腹部的、羊膜的、腹水的、关节穿刺液、心包的、腹膜的、滑膜的、胸膜的、胸腔穿刺液 |
1.用2%碘酒充分消毒皮肤 2.经皮穿刺抽吸或外科获取标本 3.立即转运至实验室 4.尽量多呈送液体:不要将拭子浸入液体内转运 |
用于细菌和酵母菌的血培养瓶或无菌容器或厌氧转运系统。 细菌≥1ml 真菌≥10ml 分枝杆菌≥10ml |
≤1h,常温 |
≤24h,常温;
心包液或用于真菌培养的液体,≤24h,4℃
|
无 |
羊水和后穹隆穿刺液应用厌氧系统送检,革兰染色前不需离心。其他液体检测最好用细胞离心制备物做革兰氏染色。 体液 (特别是关节液)如果清亮且无脓,床旁直接注入血培养瓶。 关节液中的吞噬细胞很活跃,可在几小时内杀死细菌。 |
|
主要病原菌:金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其它β溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其它革兰阴性杆菌、 非病原菌:凝固酶阴性葡萄球菌、少量的棒状革兰阳性杆菌 |
表10男女生殖器标本
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
||
原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
|||
羊膜 |
1.经羊膜穿刺、剖宫产、子宫内导管抽吸 2.将液体转入厌氧转运系统 |
厌氧转运系统,≥1ml |
≤15min,常温 |
≤2h,常温 |
无 |
不能接受用拭子采集或经阴道抽吸的羊膜标本,因为有潜在的阴道共生菌的污染 |
前列腺 |
1.用碘制剂消毒皮肤 2.用导管抽吸液体 |
厌氧转运系统,≥1ml |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
|
宫颈 |
1.用涂有润滑剂的扩阴器使宫颈可见 2.用拭子从宫颈上拭去粘液和分泌物,丢掉拭子 3.用新的无菌拭子紧贴宫颈内壁轻轻采样 |
拭子转运系统 |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
可在渗出液中发现淋球菌,而衣原体可感染特定的细胞。 |
后穹隆 |
抽吸液 |
厌氧培养,〉1ml |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
|
子宫内膜 |
1.通过导管经宫颈采样 2.将标本全部转入厌氧转运系统 |
厌氧培养,〉1ml |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
|
妊娠产物 |
1.将组织的一部分送入无菌容器 2.如果从剖宫产获得,立即转入厌氧转运系统
|
无菌容或厌氧转运系统 |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
不要处理恶露,该标本的培养不一定提供临床上有意义的结果,而且该结果可能会有误导作用。 |
女性尿道 |
患者排尿1h后采集 1.拭去尿道口的分泌物 2.用拭子通过阴道,靠耻骨联合,按摩尿道,采集尿液 |
拭子转运 |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
如未获得尿液,用肥皂洗外尿道,并用水冲洗,用泌尿生殖道拭子插入尿道2-4cm,旋转拭子2s |
阴道 |
1.清除过多的分泌物和排出液 2.用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜处获取分泌物 3.如果需要涂片,再用一个拭子 |
拭子转运 |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
|
女性或男 性的损伤 |
1用无菌盐水清洗损伤部位,用解剖刀刃切去损伤表面 2.使渗出物聚集 3.按压损伤底部,用无菌拭子用力采集渗出物 |
拭子转运 |
≤2h,常温 |
≤2h,常温 |
1/d |
用暗视野显微镜检查来辨认梅毒螺旋体,用载玻片接取渗出液,加盖玻片,放在保湿的装置里(每个平皿用一个湿纱布)立即转运到实验室。检测梅毒的标本不交送培养 |
男性前列腺
|
1.用肥皂和水清洗阴茎头 2.通过直肠按摩前列腺 3.用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内 |
拭子转运或无菌管
|
≤2h,常温
|
≤2h,常温
|
1/d
|
按摩后立即采集尿标本,可获得更多尿道和膀胱微生物相关性的结果。精液也可以培养 |
男性尿道 |
用泌尿道生殖拭子插入尿道腔2-4cm,旋转拭子,至少停留20s,而使之容易吸收 |
拭子转运 |
≤2h,常温
|
≤2h,常温
|
1/d |
|
|
主要病原菌: 淋病奈瑟菌、滴虫、酵母菌或女性的细菌性阴道病综合征、孕妇携带的B群β溶血链球菌 |
表11真菌
标本类型 |
采集 |
时间和温度 |
重复采样限制 |
说明 |
||
原则 |
装置和 最小量 |
转运 |
储存 |
|||
皮肤 真菌 |
用75%乙醇清洗患处、在损伤的边缘轻轻挂擦皮肤表面。不要出血。将样本置于清洁容器内或两个清洁玻片之间。 |
清洁容器,刮擦的量足以覆盖图钉头部 |
≤2h,常温 |
|
1/d部位 |
如标本处于两玻片之间被呈送,应将两玻片粘牢,并置于信封内 |
组织 |
用无菌容器呈送 小样本应滴加几滴无菌生理盐水保持湿润 不能使组织干涸 |
厌氧转运系统或无菌旋帽瓶,需要加一些盐水 |
≤15min, 常温 |
≤24h,常温 |
无 |
呈送组织的量尽可能多。 不要呈送在表面简单摩擦拭子
|
头发,皮肤真菌病 |
1.用镊子采集至少10-12根具有完整并部感染头发 2.放入清洁的管内或容器内 |
清洁容器10根头发 |
≤2h,常温 |
|
1/d部位 |
在刮擦损伤的同时,如有头皮屑,应采集。注意近期所采取的人和抗真菌治疗 |
指甲,皮肤真菌病 |
1.用75%乙醇的纱布(非棉花)擦指甲 2.剪去感染的部分,从指甲下收集材料或碎片 3.将材料放入清洁容器内 |
清洁容器刮擦的足量以覆盖图钉头 |
|
≤2h,常温 |
1/d |
|
|
主要病原菌:新型隐球菌、人芽囊原虫、皮肤藓菌、其它真菌(考虑标本来源和病人情况) |
表12医院感染监控标本
标本类型 |
采集原则 |
物体表面 |
1.用5cm×5cm 的标准灭菌规格板,放在被检物体表面,要求采样面积≥100cm2 ,连续采样4个。 2.用含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子一支,在规格板内横竖往返均匀涂擦各五次,并随之转棉拭子。 3.剪去手接触部位后,将棉拭子投入10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内,立即送检。 4.门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。 |
医疗器械 |
1.将存放在有效期内的医疗器械直接送微生物科室。 2.送检时间不得超过六小时,若样品保存于0~4摄氏度,,则不得超过24小时 |
空气(平板暴露法) |
1.采样时间:在消毒处理后,操作前进行采样 2.布点方法:室内面积≤30 m2,设内、中、外对角线3点,内、外点布点部位距离墙壁1m处;室内面积>30 m2,,设4角及中央5点,4角的布点部位距离墙壁1m处。 3.采样方法:将普通营养琼脂平板(直径为9cm)放在室内各采样点处,采样高度为距离地面1.5m。采样时将平板盖打开,扣放于平板旁,暴露5分钟,盖好立即送检。 |
医务人员手 |
1.被检人洗手消毒后(切勿擦干),五指并拢。 2.将棉拭子浸泡在含相应中和剂的无菌洗脱液中。 3.用棉拭子从双手屈指面从指根到指端往返涂擦两次(一只手涂擦面积约30cm2,),并随之转动采样棉拭子。 4.剪去操作者手接触的部位,将棉拭子投入10ml的含相应中和剂的无菌洗脱液的试管中,立即送检。 5.将采样管在混匀器上震荡20s或者用力振打80次。 6.用无菌吸管吸取1ml带检样品接种于灭菌平皿。 7.每一个样本接种在2个平皿,再加入已溶化的45~48摄氏度的营养琼脂15~18ml,边倾倒边摇匀,待琼脂凝固。 8.将平皿之36摄氏度温箱培养48h,计数菌落数。 |
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